我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化,老是没有菌长,转化过程、感受态没问题,我怀疑是连接的问题,现在我直接把质粒酶切回收后不加目的片段,直接让它自连,也不长菌,开始用的Fermenter

我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化,老是没有菌长,转化过程、感受态没问题,我怀疑是连接的问题,现在我直接把质粒酶切回收后不加目的片段,直接让它自连,也不长菌,开始用的Fermenter 在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么 质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时做对照：质 我在构建质粒：载体大小为9kb,目的片段为3.4kb,连接产物可以用普通的热击方法转化感受态Ecoli.DH5a吗? 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 真核重组质粒构建需要pMD18T载体么?我现在构建真核重组质粒,是合成引物,pcr出目的片段,目的片段的双酶切胶回收、pEGFP-C1质粒的双酶切胶回收,T4连接酶连接,转化,送去测序.想问下这步骤对么? 转化到大肠杆菌中的质粒会甲基化吗?看到文献说大肠杆菌中的质粒会甲基化,那么用T载体与目的片段连接后转化到大肠杆菌中,会被甲基化吗?急, 质粒转化大肠杆菌的目的? pUC19连接了大于3kb的片段,提取质粒时质粒变小了,丢了600bp,这样我就测不到目的基因序列,怎么办? 酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后, 最近在做转化实验,转化到大肠杆菌里面,请问一下什么是假阳性啊是不是指载体没有与目的基因连接,就直接进行转化,如果是这样,在进行“蓝白斑”筛选时,原理是当外源片段插入到载体质粒 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 质粒与目的基因的连接产物是? 目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 质粒与目的基因连接得到几种重组质粒 表达质粒构建中,做带有目的基因片段的pcr之前,需要对带有目的基因片段的质粒进行酶切吗?... 目的基因片段与载体质粒的选择?多长的目的基因片段选什么样的载体质粒?这之间有些什么界限啊~哪个晓得回一哈下哦, 做转化的时候一个菌里会转进两个不同质粒吗?如果这两种质粒一个是载体自连的，一个是载体和目的片段连接的，那么这两种质粒能共同存在在一个菌里，并大量复制吗