PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/05 18:52:00
PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.

PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
PCR 引物设计,
在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.

PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GC rich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GC rich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的参考序列上设计引物就ok咯

巢式扩增

可以,但是要注意一些细节,参见重组PCR
http://www.sciencenet.cn/m/user_content.aspx?id=207346

可以,中间用含20bp左右的相同碱基的引物就可以,overlap-PCR
但没有必要分两段,overlap之后还是比较麻烦的,要按1:1加扩增产物,再连接两片段,通常点突变想回复的时候,或者3000bp以上的时候采用over-lap
GC含量高也没关系,俩引物TM值别差太多就可以,下游引物可以长一点啊,把俩个TM值调到相似...

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可以,中间用含20bp左右的相同碱基的引物就可以,overlap-PCR
但没有必要分两段,overlap之后还是比较麻烦的,要按1:1加扩增产物,再连接两片段,通常点突变想回复的时候,或者3000bp以上的时候采用over-lap
GC含量高也没关系,俩引物TM值别差太多就可以,下游引物可以长一点啊,把俩个TM值调到相似

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PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗. 对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? 如何设计real-time PCR 引物请问我想设计一个基因的引物,既能扩增人类也能扩增小鼠的该基因,该如何操作呢? 我想问根据同一个基因设计的两个引物,都在小麦中扩增,扩增片段大小是否一样? PCR的扩增基因的引物是什么 如何确定这个是否是我要的目的基因序列?本人需要获得一个未知的基因,通过设计引物PCR扩增获得了一个片段,但是在进行Blast比对时,选择Highly similar sequence 的话找不到显著相似的序列,而选择 pcr扩增中,如何设计引物? 在进行PCR实验扩增时如何设计引物?为什么要用引物?原理是什么? 设计性实验:PCR基因扩增(在线等……)已知PaDREB基因长为600bp左右,请通过PCR扩增获得DNA片段. 要求从引物设计,PCR反应体系和反应程序方面设计该实验.片段如下:ATGGATTATTCGCAGTACGG…………CGTCCTTGTGG 设计性实验:PCR基因扩增(在线等)已知PaDREB基因长为600bp左右,请通过PCR扩增获得DNA片段.要求从引物设计,PCR反应体系和反应程序方面设计该实验.片段如下:ATGGATTATTCGCAGTACGG…………CGTCCTTGTGGAACGATTA 为什么在PCR扩增DNA片段时,要引入两种引物?一种不行吗? PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kcal/mol这样的引物可用吗? 关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗?在基因诊断时,已知致病基因序列设计的引物也能同时扩增正常人该段基因吗.比如镰状细 PCR为什么能扩增特意的基因片段呢虽然有引物,但是PCR延伸的时候不是把不要的基因也复制下来了吗,不懂 谁能通俗易懂的给我解释一下PCR反应过程中,引物与模板如何结合?扩增出来的是上下游引物之间的片段呢?还是就是引物片段?最终目的不是扩增目的基因,观察多态性的. 下载你感兴趣的一个基因全序列.设计一个引物,内部或两端引物,指出扩增片段的大小.引入设计软件介绍.最好是关于primer的~~