重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/05 07:35:13
重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制

重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制
重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.
挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?
会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.
还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制酶,先在30度切了一个小时,又在37度切了一个小时,酶切用的是40微升体系,连接用的是1.5mL Ep管.连接用的是7 微升体系,连接体系中没加ddH2O.

重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制
质粒没切开啦

转化的大肠杆菌是培养于含有X-gal和某种抗生素(如果载体是pBR322,是氨苄菌体内转入重组质粒,载体与目的基因相连,破坏了lac Z' --->白色菌落(我用的是pET-28a,卡那霉素抗性,没有蓝白斑筛选,转化后长出的菌落都应是含有质粒的,只是质粒上没有目标基因。...

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转化的大肠杆菌是培养于含有X-gal和某种抗生素(如果载体是pBR322,是氨苄菌体内转入重组质粒,载体与目的基因相连,破坏了lac Z' --->白色菌落(

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重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制 重组质粒转化大肠杆菌注意事项(用热击法). 怎样鉴定大肠杆菌质粒转化后获得的菌落是否为阳性? 质粒转化大肠杆菌的目的? 将目的基因导入大肠杆菌,有可能重组质粒进入大肠杆菌但未与大肠杆菌质粒结合么? 设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤 将重组质粒导入大肠杆菌,先用氯化钙溶液处理大肠杆菌和细胞壁有关?为什么 “将重组质粒导入大肠杆菌,先用氯化钙溶液处理大肠杆菌” 为什么这与细胞壁有关 从大肠杆菌中分离出来的质粒,经过Dna重组后,只能导入大肠杆菌中么? 大肠杆菌转化过程中如何排除假阳性 转化酵母的重组质粒为什么要线性化 为什么可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 重组质粒已成功转入大肠杆菌内,-20°冻存,怎样复活,扩大培养? Clontech试剂盒的质粒如何长期保存?是转化大肠杆菌后保存含有质粒的菌种吗?还是转化酵母? 最近在做转化实验,转化到大肠杆菌里面,请问一下什么是假阳性啊是不是指载体没有与目的基因连接,就直接进行转化,如果是这样,在进行“蓝白斑”筛选时,原理是当外源片段插入到载体质粒 大肠杆菌的转化过程中,会不会出现假阳性的结果,为什么?如何排除 pcdna3.1作为载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选酶切了hindⅢ和EcoRⅠ, 大肠杆菌DH5α与XL1-Blue 的区别哪一种适合pcDB质粒的转化?